Bakteriyel Endotoksinler Testi (BET), gram-negatif bakterilerin hücre duvarının bir bileşeni olan bakteriyel endotoksinlerin tespiti ve miktarının belirlenmesi için in vitro bir testtir. BET, kardiyovasküler sistem, lenfatik sistem veya beyin omurilik sıvısı ile doğrudan veya dolaylı teması olan tıbbi cihazlar için lot bırakma testinin bir parçası olarak gerçekleştirilir. Enjekte edilebilir farmasötik ürünler de bakteriyel endotoksinler için test edilmelidir. Su sistemlerinin ve gelen malzemelerin rutin olarak izlenmesi, sürecin nihai ürüne endotoksin katkısı yapmamasını sağlamaya yardımcı olabilir.
Bu test aynı zamanda Limulus Amebosit Lizat (LAL) testi olarak da bilinir ve bazen pirojen testi olarak adlandırılır (çünkü bakteriyel endotoksinler, insanlar dahil memelilerde ateşe neden olabilir). Ancak BET, USP <151> bölümünde açıklanan tavşan pirojen testi ile karıştırılmamalıdır.
Tüm testler USP bölüm <85>, USP bölüm <161>, ANSI/AAMI ST72:2011, EP 2.6.14, JP 4.01 ve Endüstri Pirojen ve Endotoksin Testleri için FDA Kılavuzu: Sorular ve Cevaplar'da belirtilen gereksinimleri karşılar.
Science by EUROLAB, bakteriyel endotoksin testlerinde endüstri lideridir. Numunenin alındığı gün test sonuçlarını sağlayabiliriz. Rutin testler için, sonuçlar tipik olarak numunenin alınmasını takip eden dört iş günü içinde tamamlanır. Validasyonlarımız ve metot geliştirme çalışmalarımız, etkili ve uyumlu olduğu kanıtlanmış bir süreçle baştan sona yapılır. 25 yılı aşkın tecrübemizle, test kriterleri hakkında sahip olabileceğiniz tüm soruları çözmenize yardımcı olmaktan mutluluk duyuyoruz ve ayrıca arıza araştırmaları ve üretim sürecinin değerlendirilmesi konusunda da yardımcı olabiliriz.
Uygulanabilir Standartlar
- USP 85
- USP 161
- USP 797
- AAMI ST72
- EP 2.6.14
- JP 4.01
Örnek Özellikler
- LAL110 : En az 3 tavsiye edilir
- LAL140 : 5 mL tercih edilir (en az 1 mL)
- LAL150 : En az 3 tavsiye edilir
- LAL155 : 1 numune tavsiye edilir
- LAL160 : 3-10 önerilir
- LAL210 : En az 3 tavsiye edilir
- LAL610 : En az 3 tavsiye edilir; sadece yerleşik hazırlıklar
Çalışma Anahattı
Bakteriyel Endotoksinler testi, kinetik türbidimetrik, kinetik kromojenik veya jel-pıhtı test yöntemleri ile yapılabilir. Bununla birlikte, kinetik test yöntemlerinin jel-pıhtı testine göre önemli avantajları vardır.
Numune ekstraksiyonları: Cihaz ekstraksiyonları, saptanabilir endotoksin içermeyen su kullanılarak gerçekleştirilir. Ekstraksiyon işlemi, cihazın düzgün şekilde çıkarılması için cihazların minimum miktarda sıvı ile yıkanmasını ve/veya yıkanmasını içerir. Pirojenik olmayan bir sıvı yoluna sahip cihazlar, ilgili sıvı yolunu 37 ± 1°C'ye ısıtılmış ekstraksiyon sıvısı ile yıkayarak ve teması en az bir saat süreyle koruyarak ekstrakte edilir. Cihaz daldırma işlemleri, cihazların bir orbital çalkalayıcı üzerinde aralıklı girdap ile 37 – 40°C'de >60 dakika boyunca ekstraksiyon sıvısında yıkanmasıyla gerçekleştirilir.
Test prosedürü: Bir BAHİS, Limulus Amebosit Lysate (LAL) kullanılarak sıvı numunenin veya numune ekstraktının analiz edilmesini içerir. LAL, at nalı yengecinin kanından yapılan bir reaktiftir. Bakteriyel endotoksinlerin varlığında, lizat reaksiyona girerek bir pıhtı oluşturur veya tekniğe bağlı olarak renk değişikliğine neden olur. Test numunesi, bilinen endotoksin konsantrasyonlarından yapılan standart bir eğri ile karşılaştırılır. Tüm testler en az iki kopya halinde gerçekleştirilir. Her testin parçası olarak bir pozitif ürün kontrolü ve negatif kontrol dahildir.
Validasyon: Test örneğinin endotoksinleri tespit etme kabiliyetine müdahale etmediğinin gösterilmesi gerekir. Bu, kinetik test yöntemleri için pozitif ürün kontrolü (aynı zamanda başak geri kazanımı olarak da adlandırılır) ve jel-pıhtı yöntemi için ayrı bir inhibisyon ve geliştirme testi ile gerçekleştirilir.
Su dışında bir çözücü içinde sulandırma, ısıyla denatüre etme, santrifüjleme veya filtreleme gibi bir işlem gerektiren numuneler, işlemin endotoksin kaybına neden olmadığını göstermek için doğrulanmalıdır. Bu, örneğin endotoksinlerle aşılanması ve aşılanmış örneğin seçilen tedaviye tabi tutulmasıyla gerçekleştirilir.
Tıbbi cihazlar için endotoksin limiti, cihaz beyin omurilik sıvısı ile temas etmeyecekse 20.0 EU/cihazdan fazla değildir, bu durumda limit 2.15 EU/cihazdır. Oftalmik implantlar ve OVD'lerin 0,2 EU/cihaz veya 0,2 EU/mL'lik bir alt sınırı karşılaması gerekebilir. Farmasötik ürünler için endotoksin limitleri, 1 saatlik bir zaman diliminde uygulanabilecek maksimum doza dayanmaktadır.
Bakteriyel Endotoksin Testi söz konusu olduğunda Science by EUROLAB, 25 yılı aşkın endüstriyel laboratuvar tecrübesi, uzman ekibi ve son teknoloji araçları ile sizlere en iyi hizmeti sunmayı taahhüt eder.
